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ELISA操作步骤(IFN-r)

ELISA操作步骤(IFN-r)

大鼠干扰素-r(IFN-r)定量EIA试剂盒使用说明

原理
本实验采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IFN-r与单抗结合,高灵敏检测样品中IFN-r的含量。
试剂盒组成
1. 48孔微孔板: 一块
2. 样品稀释液:一瓶 6ml
3. 第一抗体工作液:一瓶 4ml
4. 酶标抗体工作液: 一瓶 6ml
5. 终止液:一瓶 6ml
6. 洗涤液(25 x):一瓶 25ml
7. 标准品:一管/二管 用前加样品稀释液250ul溶解,溶解后4度可保存一周
8. 底物液A:一瓶 6ml
9. 底物液B:一瓶 6ml
10. 坐标纸: 一张
11. 封板纸 一张
准备试剂与收集血样
1. 洗涤液:用重蒸水1:25稀释
2. 收集血液标本:采集血清尽早检测,2-8oC保存一天;需更长时间须冷冻(-20 oC)保存,避免反复冻融。
检测程序
1.建立标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100ul,第一孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔,蕞后,从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照,第八孔为零孔。
2. 加样:待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3. 将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
5. 每孔(除零孔)加第一抗体工作液50ul,置37℃ 60分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔(除零孔)加酶标抗体工作液100ul(两滴),将反应板置37 oC 60分钟。
8. 洗板:同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反应15分钟。
10. 每孔加入1滴终止液混匀。
11. 在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除零孔值后再行计算。
2. 以标准品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0pg/ml之OD值在双对数纸上作图,画出标准曲线。通过标本的OD值可以在标准曲线上查出其浓度。或使用计算机软件,绘制出标准曲线,计算样品含量。
注意事项
1. 以上标准孔及待查样品均建议做复孔,每次测定应同时制作标准曲线。
2. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。有效期6个月。
3. 本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用,溶液应轻轻摇匀后使用。
4. 本试剂盒含2M硫酸,不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。
5. 板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
6. 本试剂盒仅供研究用。